蛋白质分析技术目前常用的有ELISA、WESTERN BLOT、免疫荧光和免疫组化。四种方法各有优缺点，其中WESTERN BLOT可以分离得到不同分子量的蛋白质，并可半定量。
在黑暗中摸索了数个月，本人对WB终于有了一点心得体会，现和大家分享。
1、下载或者找一本权威的有关于WB的protocol，打印出来，在做的过程中反复阅读，以便熟悉所有的步骤；
2、实验室中最好有人已经在你前面做过WB，这样的话遇到问题可以请教；
3、试剂的配制是基础性工作，需要一丝不苟的态度；
4、首次裂解蛋白后需要对蛋白质含量进行测定，以了解样本的蛋白质含量；
5、SDS－PAGE配的好不好关系到蛋白质电泳分离的效果，需要选择合适的分离胶浓度和厚度，但一般情况下10%，0.75mm的胶最常用；
6、半干转恒流电转膜需要掌握合适的电流和时间，通常是根据膜面积*5得出电流值，40kDa平均转膜时间为30min，大于40kDa需要延长而小于40kDa可略短，记住转膜前膜一定要用甲醇浸泡1min左右；
7、封闭液用5%脱脂奶粉效果好于3%BSA，时间可略长一些;
8、仔细阅读一抗及二抗说明书，从推荐的浓度开始进行一抗和二抗的孵育，不过，往往需要试验多种浓度后才能得到最佳的效果；
9、ECL染色、显影和定影是最后的精彩时刻，ECL适量即可，曝光和显影时间与荧光亮度成反比。
10、结果分析：
（1）一片白：膜上无蛋白，抗体失效；
（2）一片黑无条带：一抗浓度不配合，二抗浓度过高或封闭、洗膜不完全；
（3）一片黑有条带：二抗浓度过高或封闭、洗膜不完全；
（4）条带清晰，背景较深：一抗浓度配合，封闭不完全或二抗浓度偏高；
（5）主条带清晰伴杂带：一抗特异性差，封闭不完全。
